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一分鐘帶你詳細(xì)了解什么是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)!

發(fā)布時(shí)間: 2022-03-28  點(diǎn)擊次數(shù): 1176次
  酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)是一種酶聯(lián)免疫技術(shù)。用于檢測(cè)包被于固相板孔中的待測(cè)抗原(或抗體)。即用酶標(biāo)記抗體,并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除,最后通過(guò)酶作用于底物后顯色來(lái)判斷結(jié)果。顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定,這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái),使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。
 
  基本原理:
  ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合,此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性,也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型,出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此,可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng),顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定,這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái),使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。
 
  特性:
  用于標(biāo)記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩(wěn)定;反應(yīng)產(chǎn)物易于顯現(xiàn);能商品化生產(chǎn)。如今應(yīng)用較多的有辣根過(guò)氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP應(yīng)用*。
 
  酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng):
  1、操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等,要先查看水育箱溫度,是否符合要求。
  2、正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺,血清殘留在反應(yīng)孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致,否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。
  3、手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大,洗滌次數(shù)不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應(yīng)孔內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孔間竄流,造成孔問(wèn)污染,導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性。
  4、要保證加液量一致 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn),造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯(cuò)誤。
  5、顯色液量不可過(guò)多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下,加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng),顯色液量不能過(guò)多,以免顯色過(guò)強(qiáng)。

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