產品概況

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。往預先包被大鼠β-防御素(β-Defensins)抗體的包被酶標板孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠β-防御素(β-Defensins)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

試劑盒組成

注:使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數量與表格是否一致

試劑盒性能

1. 樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為95以上。
2. 批內變異系數與批間變異系數應小于10%。

需自備的試劑盒器材

1. 標準規格酶標儀
2. 37℃恒溫箱
3. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器
4. 去離子水，用來稀釋洗滌緩沖液

樣品收集、處理方法

1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，室溫血液自然凝固10 - 20分鐘，2000 - 3000 rpm離心20分鐘，將血清和紅細胞迅速小心地分離，收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑。混合10 - 20分鐘后，2000 - 3000 rpm離心20分鐘。收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
3. 細胞上清液：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。 2000 - 3000 rpm離心20分鐘，收集上清。
4. 組織勻漿：標本采集后用液氮迅速冷凍保存備用。使用時取適量標本，加入一定量的 PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分后，2000 - 3000 rpm離心20分鐘，收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

樣品保存

如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

結果計算

繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度。或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

β-防御素(β-Defensins)ELISA試劑盒