產(chǎn)品概況

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。往預(yù)先包被人β-防御素2(HBD-2)抗體的包被酶標(biāo)板孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人β-防御素2(HBD-2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成

注:使用前請(qǐng)檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否一致

試劑盒性能

1. 樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為95以上。
2. 批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)小于10%。

需自備的試劑盒器材

1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 37℃恒溫箱
3. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器
4. 去離子水，用來稀釋洗滌緩沖液

樣品收集、處理方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，室溫血液自然凝固10 - 20分鐘，2000 - 3000 rpm離心20分鐘，將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離，收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑。混合10 - 20分鐘后，2000 - 3000 rpm離心20分鐘。收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
3. 細(xì)胞上清液：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。 2000 - 3000 rpm離心20分鐘，收集上清。
4. 組織勻漿：標(biāo)本采集后用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。使用時(shí)取適量標(biāo)本，加入一定量的 PBS，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分后，2000 - 3000 rpm離心20分鐘，收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

樣品保存

如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

結(jié)果計(jì)算

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在 Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度。或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

β-防御素2(HBD-2)ELISA試劑盒